簡要描述:BTX ECM 399電穿孔儀適用于動植物、細菌、酵母、哺乳動物、人類細胞(包括活體細胞)的轉(zhuǎn)基因等操作,操作方法可參照相關(guān)文獻,及向廠商索要。ECM399轉(zhuǎn)基因儀主要用于哺乳動物轉(zhuǎn)染、細菌酶轉(zhuǎn)化,具有脈沖長、磁場強為其特點。
BTX ECM 399電穿孔儀
適用于動植物、細菌、酵母、哺乳動物、人類細胞(包括活體細胞)的轉(zhuǎn)基因等操作,操作方法可參照相關(guān)文獻,及向廠商索要。ECM399轉(zhuǎn)基因儀主要用于哺乳動物轉(zhuǎn)染、細菌酶轉(zhuǎn)化,具有脈沖長、磁場強為其特點。
BTX ECM 399電穿孔儀應(yīng)用舉例
高壓型用于:DNA或誘變等大腸桿菌結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)基因
低壓型用于轉(zhuǎn)染、淋巴、髓膠質(zhì)成纖維和COS-7細胞
無論任何一種哺乳動物細胞均可選擇不同的電壓和脈沖范圍,并且脈沖可隨時調(diào)整
細菌/酵母轉(zhuǎn)化(系統(tǒng):ECM399/630)
電穿孔現(xiàn)在被認作是轉(zhuǎn)化細菌及酵母的的方法。革蘭氏陰性細菌(例如大腸桿菌)一般比革蘭氏陽性細菌更容易轉(zhuǎn)化,因為他們的細胞壁組成不同。對于革蘭氏陰性細菌常常可以獲得10的10次方轉(zhuǎn)化2/微克DNA的轉(zhuǎn)化效率,而對于革蘭氏陽性細菌,一般可以得到10的6次方轉(zhuǎn)化2/微克DNA。Chang等人(1997)成功對一個mtz-敏感的Heliobacterpylori菌株進行電穿孔以傳遞mtz抵抗性。Planelles等人(1999)使用電穿孔轉(zhuǎn)化大腸桿菌,以避免使用包裝物質(zhì)。最近電穿孔儀器方面的進展將使研究人員能夠進一步優(yōu)化細菌轉(zhuǎn)化(例如脈沖長度產(chǎn)生方面擴展的功能條件)。
RNA、DNA、蛋白質(zhì)以及小分子都已經(jīng)通過電穿孔的方法轉(zhuǎn)入酵母。沒有必要在電穿孔前部分去除酵母細胞壁,因為在完整酵母電穿孔方面的進展可以產(chǎn)生高的轉(zhuǎn)化率。Faber等人(1994)年優(yōu)化了S.Cerevisiae的實驗方案,使用HansenulaPolymorpha獲得了比以前的報告增加300倍的轉(zhuǎn)化效率。
在質(zhì)粒修復(fù)中,質(zhì)粒從酵母轉(zhuǎn)入大腸桿菌以進行詳細的DNA序列分析,這是另外一種重要的技術(shù)。這種兩個步驟的過程被電穿孔進行了簡化,用于驗證隱性基因的結(jié)構(gòu),將其導入酵母,看基因性和表現(xiàn)性之間的關(guān)系。已經(jīng)建立了標準的實驗方案使用指數(shù)衰減波發(fā)生器例如BTXECM630轉(zhuǎn)化細菌/酵母。使用方形波電穿孔儀的實驗方案,例如BTXECM830,來轉(zhuǎn)化細菌/酵母。研究人員還成功將大的質(zhì)粒(BAC及YAC)導入細菌。電穿孔杯是細胞及酵母電穿孔的附件,而Model747共軸電極使用則變得越來越普遍。
BTX ECM 399電穿孔儀技術(shù)參數(shù)
高壓模式 | 電壓 | 10-2500V,10V調(diào)進 |
電阻 | 150Ω | |
電容 | 36μF | |
低壓模式 | 電壓 | 2-500V,2V調(diào)進 |
電阻 | 151Ω | |
電容 | 1050μF |
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